引言
还原性谷胱甘肽（GSH）是细胞内最重要的抗氧化剂之一，也是评估氧化还原状态、代谢健康及药物敏感性的重要生物标志物。随着实验室对高灵敏度、高复现性检测的需求日益增加，标准化、完整的GSH检测实操流程显得尤为关键。精准的GSH检测结果，是判断细胞氧化还原状态、评估机体抗氧化水平、探究疾病发病机制及验证药物干预效果的关键依据。本文整理了还原性谷胱甘肽（GSH）检测完整实操流程，从样本预处理、试剂配制、实验操作，到结果计算、常见问题排查，全程细化拆解、清晰易懂，助力大家高效、精准完成GSH检测实验。
实验原理
还原型谷胱甘肽（GSH）可与二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）反应产生硫代硝基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物，硫代硝基苯甲酸是一种黄色化合物，在412nm 处，可进行比色定量测定还原型谷胱甘肽（GSH）的含量。检测范围：2-600 μmol/L 灵敏度2 μmol/L。
主要仪器与试剂
多功能酶标仪
实验步骤
1．提前取出试剂盒，平衡至室温。2．标准品溶液的配制：临用前加入 1mL 的蒸馏水溶解，配置成 10mmol/L 的标准溶液。2-8℃可以保存 6 周。取 10mmol/L 标准溶液 200 μL 加 1800 μL 蒸馏水混合均匀 1mmol/L 标准品母液。把标准品母液(1mmol/L)用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品：0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、150μmol/L、200μmol/L、250μmol/L、300μmol/L、400μmol/L。
3．酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 412nm。
4．样本上清制备：取 80uL 待测样本，加 80uL 试剂一，混匀，4500 g 离心10min，取上清液待测（若上清液中含有部分沉淀物，将上清液转入新的 EP管中，再次离心）。
5．样本测定（在 96 孔板中依次加入）。
☑ 混匀，常温静置 5min 后分别检测各孔在 412nm 处的吸光度。
6．实验结果计算。标准品拟合曲线：y=ax+b。（y：标准品 OD 值-空白孔OD值；x：标准品浓度；a：标准曲线斜率；b：标准曲线截距）
注意事项
1. 不能使用过期产品，不同试剂盒组分不得混用。2. 建议实验前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定，根据预实验的结果对样本做适当的稀释或浓缩。
3. 实验中请穿着实验服并戴乳胶手套做好防护工作。
4. 试剂严格按保存条件保存，不同测试盒中的试剂不能混用。对于体积较少的试剂，使用前请先离心，以免量取不到足够量的试剂。
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