凯斯艾生物科技(苏州)有限公司
试剂与仪器 异氟烷,伊文氏蓝(比利时),TTC(美国)动物手术显微镜(美国),小动物呼吸机(美国),生物信号采集系统(美国),显微外科手术器械(F.S.T,德国),电刀(美国),22号套管穿刺针(美国),8-0带线缝合针(日本),超高分辨率小动物超声系统(加拿大),大体显微镜拍照系统(日本),术后加热康复系统(美国)。
与术前准备 小鼠在5%异氟烷吸入后涂脱毛膏进行备皮处理。备皮完成后,取仰卧位,将小鼠四肢涂抹电胶,并用胶布将头部与四肢固定在生物信号采集系统上。快速打开小鼠口腔,调整光源位置,直至看见规律开合的声门,用22G套管穿刺针针鞘从口腔进入穿过声门行气管插管,插管成功后连接呼吸机,调整呼吸参数使呼吸频率RR为139bpm,潮气量为0.165mL,每分钟潮气总量为22mL,异氟烷浓度调整为1%~2%进行维持。
心肌梗死动物模型的手术方法 小鼠改为右侧卧位,铺无菌单后,在距胸骨旁0.5cm处剪开1cm左右斜行切口,依次用电刀切开胸大肌与胸小肌,看见肋骨后,用小镊子夹住肋骨,在第3肋间用另一个镊子轻轻刺破肋间肌,随后用眼睑撑开器扩张手术视野,剪开心包膜充分暴露心脏。调整光源,直至看见在心肌下走行的粉白色冠状动脉左前降支,在距离左心耳下缘1.5mm处用8-0MANI针线结扎,进针深度约0.6mm,宽度约1mm。进针时应注意控制进针深度与结扎肌肉的宽度,太深易造成心脏穿孔的意外,太宽会加大心肌损伤且易造成结扎不彻 底。结扎完成后,镜下可见左前降支供血区域迅速发白,与正常心肌有明显的分界线形成。缝合胸壁后直接缝合皮肤,无需缝合肌肉组织,避免缝合肌肉造成粘连与化脓性炎症,且更便于术后排气。完成后轻轻挤压小鼠胸腔排出残余气体,避免形成气胸。上述操作完成后,小鼠恢复仰卧位,关闭系统,呼吸机维持正常通气直至待小鼠恢复正常呼吸节律。待轻捏鼠尾有疼痛反应后,测量术后心电图。随后放入鼠笼,腹腔注射镇痛剂布托啡诺镇痛,软食喂养,并放在37℃加热垫上过夜,过夜时鼠笼应有一半是放于加热垫外,防止老鼠因为过热而出现意外死亡。
心脏超声心动图评价 术前1d与术后1d将小鼠放在5%异氟烷的箱中后,仰卧位固定于操作台上,以1%异氟烷维持。胸骨旁短轴切面以左心室乳头肌水平的切面为标志点,用M型超声模式记录下左心室射血分数,左心室短轴缩短率,左心室收缩末期内径,左心室舒张末期内径,左心室收缩末期前壁厚度,左心室舒张末期前壁厚度,左心室收缩末期后壁厚度, 左心室舒张末期后壁厚度,左心室收缩末期容积,左心室舒张末期容积。胸骨旁长轴切面以左心室流出道水平切面为标志点,用B型超声心动图记录室壁运动图像。
心肌组织病理学观察 小鼠接上呼吸机后,在颈部正中开1.5cm纵向切口,钝性分离皮下脂肪肌肉,暴露颈外静脉,用29G胰岛素注射针从颈外静脉注入0.4mL1%伊文氏蓝溶液。注射完成时,可见小鼠鼻尖及四肢都变成蓝色。待伊文氏蓝液在小鼠体内循环3~5min后,处死小鼠取出心脏。取出的心脏立即用预冷的磷酸盐缓冲液(PBS)漂洗干净,放入提前在﹣80℃冰箱冷冻15min的脑膜具,用刀片固定好后可见心脏迅速变白发硬,此时可以切片,每片厚度为2mm。若心脏不够硬,可放入负﹣80℃冰箱继续冷冻3~5min使其变硬。切片完成后,按顺序摆放进12孔板内,每孔加2mL 1%TTC溶液,暗盒避光,37℃孵育30min。随后换2mL4%多聚甲醛溶液,避光固定10min。随后用显微镜拍照,并用软件测量心肌梗死部位各区域面积。
以上的部分就是对于心肌梗死动物模型建立的基本材料以及方法的分析,以及也是说到了对于心脏超声心动图评价以及心肌组织病理学观察部分的分析。