引言
在肾脏相关科研实验中，组织研磨是蛋白提取、指标检测的基础步骤，研磨的均匀度直接决定后续实验数据的准确性。很多实验新手常常因操作不规范，出现研磨不充分、蛋白降解、样品污染等问题，白白浪费珍贵的样品。今天就给大家带来一份详细的小鼠肾脏组织研磨标准操作，从样品处理到研磨液配制，从研磨参数到样品保存，每一步都标注重点，新手也能轻松上手，适配后续各类蛋白相关实验。
主要仪器与试剂
实验步骤
1.将小鼠肾脏组织从-80℃冰箱取出，于冰上融化后，放入2.0 mL离心管中。
2.在样品管中加入4℃预冷的研磨液，肾脏重量和研磨液的比例是1：10（质量体积比g/mL），例如，每0.1g组织中加入1mL研磨液。研磨液配制方法：T-PER组织蛋白提取试剂，含1x Halt蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物。
3.每样放入2颗预冷钢珠（直径3 mm），1200 ~1500 rpm，研磨1min/次，共研磨两次，观察研磨均匀度。
4.4℃，10000g离心5min后取上清，避免吸到沉淀。
5.取上清液混匀后，使用BCA法检测样品总蛋白浓度。
6.将剩余上清液按要求分装后转移至-80℃冰箱保存。
高通量组织研磨仪
注意事项
·全程低温操作：从样品融化、研磨液配制，到研磨、离心、样品保存，所有步骤均需在冰上或4℃环境下进行，防止蛋白降解。·研磨参数：若仍有颗粒，可适当增加研磨次数，应注意避免转速过高、时间过长导致样品过热，或转速过低、时间不足导致研磨不充分。
·避免污染：操作过程中戴手套、口罩，移液枪吸头一次性使用，避免交叉污染；离心后吸取上清液时，动作轻柔，避免吸到沉淀。
·样品保存：分装后的样品需快速放入-80℃冰箱，避免反复冻融。
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