引言
在生命科学和医学研究领域，3D细胞培养技术正在悄然改变着我们对细胞世界的认知方式。与传统的2D单层培养不同，3D细胞培养——无论是细胞球（spheroids）、类器官（organoids）还是其他三维结构——能够更真实地模拟体内细胞生长的微环境，在精准医学、药物研发和再生医学等领域展现出巨大潜力。
速来围观
今天，我们就来系统地聊一聊：如何将培养的3D细胞制备成组织蜡块，并完成后续的病理检测。
科学分享逻辑
1 为什么3D细胞需要做成蜡块？·3D培养物通常体积微小、结构脆弱，固定后更容易碎裂，在洗涤过程中极易损失。如果直接进行整体染色观察，一次实验就会消耗掉全部样本，无法开展后续的多项检测。
·而将3D细胞制备成石蜡蜡块后，一个蜡块可以切出数十甚至上百张切片，分别进行HE染色、免疫组化、免疫荧光等多种检测。这不仅最大化了珍贵样本的利用率，还能获得更加稳定、可重复的检测结果。
2 3D细胞蜡块制备全流程
制备3D细胞蜡块，核心思路其实与常规组织蜡块相似，都包括“固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片”这几个关键步骤。但由于3D细胞样本的特殊性，每个环节都有需要特别注意的细节。
第一步：3D细胞的培养与收集
以经典的3D细胞球培养为例，研究者可以采用超低吸附培养板或transwell小室培养细胞，将目标细胞培养成三维细胞球。当细胞球生长到合适大小后，即可开始收集。收集时需轻柔操作，避免破坏细胞球的立体结构。可以在收集前先用伊红对细胞球进行预染色标记，这样可以显著提高细胞球在后续操作中的能见度，方便定位和操作。
第二步：固定及前处理
·1. 小心吸弃培养基，PBS轻柔漂洗。
·2. 固定：加入4% PFA，室温固定6小时左右。
·3. 吸弃 PFA，PBS 充分洗涤。
·4. transwell小室培养的3D细胞将小室置于体视显微镜下，用显微剪刀沿小室塑料支撑圈内侧，小心剪下圆形PET细胞膜，包裹进浸湿的称量纸中，放入包埋盒，进行后续脱水。
·5. 培养板培养的细胞，可以转移至离心管，用离心机轻度离心至细胞沉底，吸弃PBS。配制2%低熔点琼脂糖，水浴溶解琼脂糖，在离心管中滴加少量琼脂糖，冰上静置15 -20min，待琼脂糖完全凝固。轻轻取出粘附细胞团的琼脂，包裹进浸湿的称量纸中，放入包埋盒，进行后续脱水。
第三步：脱水 透明 浸蜡
·1. 70% 乙醇 30 min
·2. 80% 乙醇 30 min
·3. 95% 乙醇 30 min
·4. 100% 乙醇Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各30 min
·8. 二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各30min
·9. 石蜡浸蜡（60℃）：石蜡 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各60 min。
第四步：包埋并制备切片
·包埋方位重点：膜片及细胞团尽量竖直摆放进行包埋。
·切片：利用石蜡切片机进行3-5μm厚度切片。切片可用于HE染色、IHC、mIF等各种病理常规及特殊染色。
3D/2D培养细胞制片及组织学检查案例分享
凯斯艾•珂玛麒病理学平台
凯斯艾•珂玛麒拥有强大且全面的病理学平台，包含组织病理学平台、免疫组化/荧光平台、临床病理学平台等，能够提供全方位的病理学服务，包括病理解剖学，组织病理学，免疫病理学，数字病理学，肿瘤病理学，毒理病理学等方面的服务。技术团队拥有国际认可的专业经验，能够为各种复杂的组织学项目提供定制服务，全方位覆盖各类检测需求。
